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男性阳痿的基因治疗方法

武汉德馨医院

2019-10-19 15:18:23

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近20年来分子生物医学Northem、Western和Southem、Blotting印迹技术及多聚酶链反应,使目的基因及基因产物能够被识剐,分离测序,合成克隆及体外表达,从而准确地推测出单个基因在细胞内所起的作用。虽然,阴茎阳痿是否存在遗传学的缺陷,缺乏足够证据,但这并不妨碍基因治疗应用于男科学阳痿的。

阳痿,是由于阴茎海绵体平滑肌细胞收缩舒张的平衡关系被破坏的结果,因此,恢复这种精细平衡关系的基因水平治疗,均可望用来治疗阳痿。基因治疗是20世纪90年代发展起来的高新技术,它不仅是基因异常引起的疾病能够得到有效的治疗,同时也为非基因异常疾病的治疗开辟了一条新的途径。研究发现一氧化氯合成酶是**的催化合成一氧化氯的酶,它的作用使L精氨酸转化成一氧化氨,一氧化氮合成酶主要有内皮细胞型一氧化氮合成酶eNOS、神经细胞型一氧化氮合成酶nNOS及诱发型一氧化氟合成酶iNOS3种同功酶。一氧化氟是介导阴茎勃起的主要神经递质。因此,一氧化氨合成酶基因,可作为阳痿的目的基因。除一氧化氮合成酶外,K+通道,血管紧张素转化酶基因 ACE,插入缺失ID的多态性等遗传学因素,也与阳痿的发病有关,也可作为基因治疗。用于基因阳痿治疗的载体,包括质粒DNA载体。大多数基因治疗的临床实验,使用的都是病毒载体,主要有逆转录病毒载体及腺病毒载体转染率高,但是,**应用时可使宿主产生免疫反应甚至损伤宿主细胞,包括激活癌基因产生的严重后果。

经动物实验证实,eNOS转基因治疗,可作为阳痿治疗很有前途的方法。阴茎为体表器官,目的基因及其产物很容易转运到阴茎海绵体内,一般一个新转染的基因,可维持数周至数月,因此,一个阳痿患者,每年接受3~4次基因注射,无需其他治疗便可保持其勃起功能。其次,基因治疗,产生一氧化氯合成酶是一种生理过程,即在阴茎疲软时,其高水平的一氧化氮合成酶,合成正常的低水平的一氧化氮,不至于导致发生阴茎异常勃起、感染及其他毒副反应。

目前,有关阳痿的基因治疗,国外已有。Christ等将编码一种特殊亚型的K+通道人类平滑肌moxi K+通道halo的裸DNA注射入大鼠阴茎海绵体,用于EFS诱导阴茎勃起时,阴茎海绵体内压作为生理学改变的客观指标,同只注射载体的以年龄配比的对照组相比,注射halo cDNA的大鼠阴茎海绵体内压均明显增加,注射1~3个月后,该效果依然明显存在,此基因治疗机制,可能与改善结合并表达外源人类K+通道基因的阴茎海绵体平滑肌细胞的超极化功能有关。这种超极化功能的改善,可能是L型电压依赖性,Ca2+通道的跨膜转运被抑制的结果。终导致细胞内钠浓度下降,加强平滑肌的舒张。Garban等用2种方法对年龄相关的大鼠阳痿模型进行基因治疗。一种方法,是在基因水平诱导生成内源性iNOS,他们分别在20~30个月龄大鼠皮下包埋渗透性泵,泵内含有iNOS诱导剂,包括LPS、鼠类INF、人类TNFa及人类IL1β泵以导管与阴茎海绵体相连。治疗20~30个月龄大鼠作对照,治疗3~6天后,测量电刺激 EFS阴茎海绵体神经诱发的勃起反应,两组相比较较前者勃起障碍有改善,且Westem印迹法,NADPH硫锌酰胺脱氢酶及一氧化氮合成酶活性测定法,均表明这些大鼠阴茎中有iNOS诱导生成。另一方法,是从大鼠阴茎平滑肌细胞RPSMC诱生的;iNOS,mRNA克隆出iNOS,cDNA,然后以脂质体作载体,将PcDNA 3 RP iNOS注射入实验组大鼠阴茎海绵体中,用外源性补充RP iNOS cDNA进行基因治疗10天后,EFS反应表明于大鼠年龄相关的阳痿亦被改善。PCR可检测出阴茎中有iNOS结构存在,RTPCR及Westem印迹法可检测iNOS cDNA表达,同**种方法比较后一种操作简单,EFS诱导的勃起反应持续时间长,效果好,而且,毒副作用反应少。Weslls等分离到微血管内皮细胞MVEC并用PKH26标记,注射于成年鼠阴茎海绵体,6~7天后,显微镜检阴茎冰冻切片发现被标记的细胞,体外阴茎组织培养亦发现有含染料的与MVEC相似的细胞生长,并且阴茎中的转基因可稳定有效的表达。

阳痿的基因治疗,同其他疾病的基因治疗一样。还处于起步阶段,存在许多问题是寻找更多有价值的目的基因,构建组织特异性或定向基因表达载体,深入研究精确调控目的基因表达的机制,组建具有调控序列的基因等。

阴茎阳痿较常见于盆腔手术患者。美国Tom Lue,利用系统生长激素或脑神经营养因子BDNF基因的基因疗法,以促进大鼠海绵体神经恢复。研究发现,接受这种疗法的大鼠神经要比未接受生长激素治疗的大鼠快。在两侧髂内动脉结扎的动物模型中,他们成功地恢复了大鼠的阴茎勃起功能。该实验分两组,一组使用血管内皮生长因子 VEGF~165基因,另一组接受腺病毒相关病毒AAV~VEGF基因治疗。结扎两组动物髂内动脉后的几分钟内,将上述制剂注射到阴茎海绵体内。结果显示,用VEGF处理的大鼠阴茎勃起功能在6周内恢复,AAV~VEGF处理的大鼠的勃起9周后还没有得到恢复,这是由于转染的AAVVEGF基因延迟了VEGF生成所致。

尽管基因疗法是令人振奋的恢复阴茎勃起功能的方法,但还需要多年的研究才可应用于临床。不过许多生长因子,已被证实有促进神经生长和血管再生作用可供临床使用,而且会成为今后预防和治疗的**。

除了基因治疗外,目前还有多种其他新疗法,正在试验应用,其中包括、持久作用于5磷酸二酯酶的抑制剂,钾离子通道开放剂作用为阴茎海绵体注射药物;多巴胺拮抗剂,如舌下含服的去水吗啡j局部用药,如前列地尔软膏及哌唑嗪复合软膏、中药等。

创建于2010年,是一家经武汉市政府批准成立的以泌尿外科为科室的男性专科医院。专注于前列腺、阳痿早泄性功能障碍生殖整形、假体手术、生殖感染、包皮包茎等男科疾病治疗,医院位于湖北省...

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